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無菌檢查為何需要14天培養(yǎng)期

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  • 發(fā)布時(shí)間： 2025-03-25
2025-03-25

無菌檢查試驗(yàn)通用培養(yǎng)基為硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基和胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基。

 

硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基主要用于厭氧菌的培養(yǎng)，也可用于需氧菌培養(yǎng)；硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基的培養(yǎng)溫度為30~35℃；硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基在培養(yǎng)期間不要?jiǎng)×艺饎?dòng)或搖晃培養(yǎng)基，以盡量減少培養(yǎng)基通氣。
胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基用于真菌和需氧菌的培養(yǎng)；胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基的培養(yǎng)溫度為20~25℃；胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基在培養(yǎng)期間可以輕緩搖動(dòng)，以增加培養(yǎng)基的通氣。 
如在加入供試品后，或在培養(yǎng)過程中，培養(yǎng)基出現(xiàn)渾濁，培養(yǎng)14天后，不能從外觀上判斷有無微生物生長(zhǎng)，可取該培養(yǎng)液不少于1ml 轉(zhuǎn)種至同種新鮮培養(yǎng)基中，將原始培養(yǎng)物和新接種的培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)不少于4天，觀察接種的同種新鮮培養(yǎng)基是否再出現(xiàn)渾濁；或取培養(yǎng)液涂片、染色、鏡檢，判斷是否有菌。USP 和 EP 規(guī)定的出現(xiàn)渾濁后的處理程序與《中國藥典》 一致，原培養(yǎng)容器與轉(zhuǎn)種培養(yǎng)容器的總培養(yǎng)時(shí)間為不少于18天。
長(zhǎng)達(dá)14天的培養(yǎng)期的主要原因：
無菌產(chǎn)品中存活的微生物在生產(chǎn)工藝過程中都會(huì)經(jīng)歷一定程度的損傷而處于亞致死的狀態(tài)，它們需要有一段修復(fù)的時(shí)間才能生長(zhǎng)繁殖到肉眼看得到的程度而被檢出；
也有可能在抑菌類產(chǎn)品中一直被抑制著的污染微生物處于亞致死狀態(tài)，需要隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)或抑菌性徹底消除后才能得以繁殖到肉眼看得到的程度而被檢出；
還有可能產(chǎn)品中污染的微生物本身屬于生長(zhǎng)遲緩的微生物，例如，痤瘡丙酸桿菌是無菌灌封中令人頭痛的一種微生物，根據(jù)經(jīng)驗(yàn)，該微生物直到在培養(yǎng)基中培養(yǎng)12天后才能生長(zhǎng)到肉眼可以觀察的濃度。所以無菌檢查法培養(yǎng)不少于14天是有必要的。 當(dāng)然，受到損傷的微生物也需要一定的延遲期才能恢復(fù)生長(zhǎng)。
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